Overlapping Fusion-PCR
酵母の2μm ori とTEF1p-EM7p-ZeoR-CYC1TTのPCR産物をOverlapping
Fusion-PCRで融合した。条件決めのために色々論文をあさってみたものの、”
私の条件では２つのフラグメントの重複はたかだか20bpなのでこの論文のは使えない”とか、”
この実験のコンディションでこんなに大量のTemplateをぶち込んだらPCRの後で電気泳動したらバンドとして見えてしまうので、
ゲルから切り出さないといけないのでは？”という、イマイチなものばかりだったので、
結局Templateの希釈系列を作って条件決めをすることにした。
参考にした論文の条件の1/24-1/100位のテンプレート量でextra
bandなしできれいに目的のPCR産物が取れることが分かった。やれやれ。
・・・というPCRの間に、職場の拡散防止措置の点検。第1弾は1時間半ほどかかった。もう、疲れました。
が、帰るまでに電気泳動でPCR産物の確認、形質転換と、PCRをもう１回。
明朝はPCR産物の電気泳動のゲルの準備、コロニーPCRの準備、deep well plateに培地を準備、
形質転換用の酵母の培養、etc.etc.
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