Rolling Circle Amplification (RCA) 産物で酵母の形質転換

Methods 日記・コラム・つぶやき遺伝子組換え業務用覚書

世間ではインド、ムンバイ市でおきた同時多発的テロ事件のニュースが流れている。280人以上死傷（うち101人死亡）とのこと。大惨事だ。---Ding et al. (2003)によれば、RCAで増幅したプラスミドの分枝状コンカテマーで酵母の形質転換が可能とのこと。Two-hyb…

2008-11-27

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Methods 日記・コラム・つぶやき遺伝子組換え業務用覚書

タンパク質の相互作用を調べるのに、Yeast Two-hybrid system (YTH)が使われてきた。もともと転写因子など核タンパク質の相互作用を調べるためのシステムなのだが、トウモロコシの種子貯蔵タンパク質間の相互作用解析などにも応用範囲は広がってきている。だ…

2008-11-20

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学問・資格日記・コラム・つぶやき遺伝子組換え業務用覚書

11月19日付けで、文部科学省二種告示”研究開発等に係る遺伝子組換え生物等の第二種使用等に当たって執るべき拡散防止措置等を定める省令の規定に基づき認定宿主ベクター系等を定める件（平成１６年文部科学省告示第７号）”改定のパブコメの結果が公表された…

2008-10-20

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Methods 遺伝子組換え業務用覚書

SDS-PAGE用のサンプル抽出法としての酵母タンパク質のalkaline prep. オリジナルKushnirov, V. Rapid and reliable protein extraction from yeasthttp://www3.interscience.wiley.com/journal/72504790/abstract?CRETRY=1&SRETRY=0改良版von der Haar, T. O…

2008-08-27

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Methods 遺伝子組換え業務用覚書

Google earthで見るとシカやウシの寝るときの方角が、地磁気の磁極を向く傾向があるというニュースが今日のトレンド。オーストラリアや南米のウシはどっちを向くんだろう。ヒトは、というと日本では北枕はいけないというが、その根拠は定かで無い。さて、…

2008-08-21

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Methods 遺伝子組換え業務用覚書

古い論文ですがオープンアクセスになっているのでメモ。 Micro-homology mediated PCR targeting in Saccharomyces cerevisiae. P Manivasakam, S C Weber, J McElver, and R H SchiestlNucleic Acids Res. 1995 July 25; 23(14): 2799– 2800. PCR産物両末端…

2008-08-09

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Methods 遺伝子組換え業務用覚書

Transformation-Associated Recombination (TAR) もどきのクローニングを試みている。たまたまコンピテントセル（というかOD600を3.5-5にあわせただけの酵母培養液、BY5677株）があまったので、Ura3遺伝子の一部を仕込んだプライマーでPCRして線形化した自…